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机构污水检测和污泥检测的粪大肠菌群方法介绍：
机构水污染物排放标准 GB18466-2005 于2005年7月27日发布，2006年1月1日正式实施。作为机构，具体应该检测哪些致病菌呢？让我们逐一分析解读。
“排放标准”对粪大肠菌群数、肠道致病菌、肠道病都做了具体的要求，而“预处理标准”仅对粪大肠菌群数做了监测要求。也就是说：执行“预处理标准”的只需监测粪大肠菌群数，而肠道致病菌和肠道病是不需要监测的。
粪大肠菌群是总大肠菌群中的一部分，主要来自粪便。在 44.5℃温度下能生长并发酵乳糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。用提高培养温度的方法，造成不利于来自自然环境的大肠菌群生长的条件，使培养出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群，从而更准确地反映出水质受粪便污染的情况。
1 操作步骤
1.1 样品准备
1.1.1 污水
污水样品应至少取200ml，使用前应充分混匀。
根据预计的污水样品中粪大肠菌群数确定污水样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少的接种量一般为10、1、0.1ml。粪大肠菌群数较多时接种量为1、0.1、0.01ml或0.1、0.01、0.001ml等。
接种量少于1ml时，水样应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量为0.1、0.01ml时，取稀释比分别为1：10、1：100。其他接种量的稀释比依此类推。
1：10稀释样品的制作方法为：吸取1ml水样，注入到盛有９ml水的试管中，混匀，制成1：10稀释样品。因此，取1ml1：10稀释样品，等于取0.1ml污水样品。其他稀释比的稀释样品同法制作。
注1：若样品为经过氯的污水，应在采样后立即用５％硫代溶液充分中和余氯。
1.1.2 污泥
污泥样品应至少取200ｇ，使用前应充分混匀。
根据预计的污泥样品中粪大肠菌群数量确定污泥样品接种量。粪大肠菌群数量相对较少的污泥样品接种量一般为0.1、0.01、0.001ｇ。粪大肠菌群数量较多时接种量为0.01、0.001、0.0001ｇ或0.001、0.0001、0.00001ｇ等。
污泥样品应制成稀释样品后供发酵试验使用。接种量0.1、0.01、0.001ｇ的稀释样品制作方法如下：取20ｇ污泥样品，加入到三角烧瓶中，加水使成200ml，混匀，制成1：10稀释样品。吸取1：10稀释样品1ml，注入到盛有9ml水的试管中，混匀，制成1：100稀释样品。按同法制成1：1000稀释样品。接种1ml1：10、1：100、1：1000稀释样品等于接种0.1、0.01、0.001ｇ污泥样品。
注1：若样品为经过氯的污泥，应在采样后立即用５％硫代溶液充分中和余氯。
1.2 发酵试验
将样品接种于装有乳糖胆盐培养液的试管（内有小倒管）中，44℃培养24ｈ。样品接种体积以及管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积根据以下条件确定：
样品为污水时，取三个接种量，每个接种量的样品分别接种于5个试管内，共需15个试管。试管内乳糖胆盐培养液的浓度与体积应根据接种量确定。若接种量为10ml，吸取10ml样品接种于装有５ml三倍浓度乳糖胆盐培养液的试管内；若接种量为1ml时，吸取1ml样品接种于装有10ml普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内；若接种量少于1ml时，吸取1ml稀释样品接种于装有10ml普通浓度乳糖胆盐培养液的试管内。
样品为污泥时，取三个接种量，每个接种量的稀释样品分别接种于3个试管内，共需9个试管。9个试管中，各装有10ml乳糖胆盐培养液。各个试管接种稀释样品体积均为1ml。
1.3 平板分离
大肠分解乳糖产酸时培养液变色、产气时小倒管内出现气泡。经24ｈ培养后，将产酸的试管内培养液分别划线接种于EMB培养基上。置于37℃培养箱中，培养18～24ｈ。
1.4 鉴定
挑选可疑粪大肠菌群菌落，进行革兰氏染色和镜检。可疑菌落有：1） 深紫黑色，具有金属光泽的菌落；2）紫黑色，不带或略带金屑光泽的菌落；3）淡紫红色，中心色较深的菌落。
上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽孢，则挑取上述典型菌落1～3个接种于盛有５ml乳糖蛋白胨培养液倒管和倒管的试管内，置于44℃培养箱中培养24ｈ。产酸产气试管为粪大肠菌群阳性管。
2 计数
根据证实有粪大肠菌群存在的阳性管数，查表1或2可得100ml污水或1ｇ污泥中粪大肠菌群MPN值。
由于表A1和表A2是按一定的三个10倍浓度差接种量设计的（污水接种量为10、1和0.1ml，污泥接种量为0.1、0.01和0.001ｇ），当采用其他三个10倍浓度差接种量时，需要修正表内MPN值，具体方法如下：
表内所列污水（污泥）接种量增加10倍时表内MPN值相应降低10倍；污水（污泥）接种量减少10倍时表内MPN值相应增加10倍。如污水接种量改为1、0.1和0.01ml时，表A1内MPN值相应增加10倍。其他的三个10倍浓度差接种量的MPN值相应类推。
由于表A1内MPN值的单位为每100ml污水样品中MPN值，而污水以1Ｌ为报告单位，因此，需将查表A1得到的MPN值乘上10，换算成1Ｌ污水样品中的MPN值。
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