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紫外可见分光光度计是一种应用很广的分析仪器。当前它已成为全世界历史悠久、使用多、覆盖面广的分析仪器。它的应用领域非常广泛,已是制药、医疗卫生、化学化工、环保、地质、机械、冶金、石油、食品、商检、生命科学、材料科学、计量科学、农业科学、林业科学、渔业科学等领域中的科研、?教学、生产工作中,使用多的分析仪器。
应用主要有:定性分析、纯度检查、参与结构分析、参与定性分析、氢键强度的测定、络合物组成及稳定常数的测定、反应动力学研究等。
(1) 法目前,法是紫外可见分光光度计诸多分析方法中使用多的的—种方法。这是一种以比耳定律A=εbc为基础的分析方法。某一物质在一定波长下的ε值是一个常数,石英比色皿的光程是已知的,也是一个常数。因此,可用紫外可见分光光度计在λmax波长处,测定样品溶液的吸光度值A。然后,根据比耳定律c = A/(εb),则可求得该样品溶液的含量或浓度。
(2) 标准法在选定的波长处,在相同的测试条件下,分别测试标准样品溶液c标和被测试样品溶液〔样的吸光度A标和A样。然后,按下式求得样品溶液的浓度或含量。
(3)比吸收系数法在药物分析中,经常采用比吸收系数法。
(4) 标准曲线法紫外可见分光光度计常用的定量分析方法是标准曲线法。首先,用标准物质配制一定浓度的溶液,然后,将该溶液配制成一系列的标准溶液。在一定波长下,测试每个标准溶液的吸光度,以吸光度值为纵坐标标准溶液 对应的浓度值为横坐标,绘制标准曲线。
(1) 利用紫外吸收光谱的数据定性如果未知物的紫外吸收光谱的大吸收峰波长Amax、小吸收峰波Amin、大摩尔吸光系数emax,以及吸收峰的数目、位置、拐点与标准光谱数据完全一致,就可以认为是同一种化合物。
(2) 利用标准物质定性对比较复杂的样品,一台紫外可见分光光度计是不能作定析的